亚洲欧美国产资源_?V在线亚洲欧洲日产一区二区_免费A级在线观看完整片_视频精品中文字幕_成年网站在线观看播放_亚洲日韩中文字幕在线_中文字幕在线观看第一页_波多野结衣乳巨码无在线观看

一般來說細(xì)胞轉(zhuǎn)染的方法主要包括：電穿孔法、顯微注射、基因槍、磷酸鈣共沉淀法、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法、多種陽離子物質(zhì)介導(dǎo)、病毒介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染等。

01

脂質(zhì)體的轉(zhuǎn)染方法原理

脂質(zhì)體作為體內(nèi)和體外輸送載體的工具，已經(jīng)研究的十分廣泛，用合成的陽離子脂類包裹 DNA，同樣可以通過融合而進(jìn)入細(xì)胞。

使用脂質(zhì)體將 DNA 帶入不同類型的真核細(xì)胞，與其它方法相比，有較高的效率和較好的重復(fù)性。

中性脂質(zhì)體是利用脂質(zhì)膜包裹 DNA，借助脂質(zhì)膜將 DNA 導(dǎo)入細(xì)胞膜內(nèi)。

帶正電的陽離子脂質(zhì)體，DNA 并沒有預(yù)先包埋在脂質(zhì)體中，而是帶負(fù)電的 DNA 自動結(jié)合到帶正電的脂質(zhì)體上，形成 DNA-陽離子脂質(zhì)體復(fù)合物，從而吸附到帶負(fù)電的細(xì)胞膜表面，經(jīng)過內(nèi)吞被導(dǎo)入細(xì)胞。

02

脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染的操作步驟

操作步驟：

(1) 細(xì)胞培養(yǎng)：取 6 孔培養(yǎng)板 (或用 35 mm 培養(yǎng)皿)，向每孔中加入 2 mL 含 1～2×105 個細(xì)胞培養(yǎng)液，37℃ CO2 培養(yǎng)至 40%～60% 匯合時 (匯合過分，轉(zhuǎn)染后不利篩選細(xì)胞)。

(2) 轉(zhuǎn)染液制備：在聚苯乙/烯管中制備以下兩液 (為轉(zhuǎn)染每一個孔細(xì)胞所用的量)A 液：用不含血清培養(yǎng)基稀釋 1-10 μg DNA，終量 100μL，B 液：用不含血清培養(yǎng)基稀釋 2-50 μgLR，終量 100μL，輕輕混合 A、B 液，室溫中置 10-15 分鐘，稍后會出現(xiàn)微濁現(xiàn)象，但并不妨礙轉(zhuǎn)染 (如出現(xiàn)沉淀可能因 LR 或 DNA 濃度過高所致，應(yīng)酌情減量)。

(3) 轉(zhuǎn)染準(zhǔn)備：用 2 mL 不含血清培養(yǎng)液漂洗兩次，再加入 1 mL 不含血清培養(yǎng)液。

(4) 轉(zhuǎn)染：把 A/B 復(fù)合物緩緩加入培養(yǎng)液中，搖勻，37℃ 溫箱置 6～24 小時，吸除無血清轉(zhuǎn)染液，換入正常培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。

(5) 其余處理如觀察、篩選、檢測等與其它轉(zhuǎn)染法相同。

注意：轉(zhuǎn)染時切勿加血清，血清對轉(zhuǎn)染效率有很大影響。